NML, 25/08/2023
Por Lily Ramsey
Dois inibidores de moléculas pequenas podem ajudar a melhorar a precisão e a eficiência da edição do gene CRISPR-Cas9
Um novo estudo publicado na Nature Communications demonstra como inibidores de moléculas pequenas podem ser usados para melhorar a precisão, e a eficiência da edição do gene CRISPR-Cas9. Os resultados demonstram como esta técnica inovadora pode ser melhorada através da utilização de dois inibidores para aumentar as taxas de inserção, e reduzir os efeitos fora do alvo. Suas descobertas são fundamentais para o avanço do uso de técnicas CRISPR em pesquisas e aplicações clínicas utilizando uma ampla gama de linhas celulares.
Edição aprimorada do genoma com CRISPR-Cas9
CRISPR-Cas9 é uma técnica de edição de genoma que se tornou uma ferramenta indispensável na pesquisa biomédica desde que foi revelada pela primeira vez em 2012. Os pesquisadores podem usar a técnica para cortar DNA em locais específicos e inserir ou remover material genético, permitindo um nível de manipulação genética que anteriormente era impossível.
No artigo da Nature Communications, os autores analisaram uma biblioteca de 20.548 pequenas moléculas para desenvolver estratégias para melhorar esta técnica de edição genética. Eles identificaram dois inibidores direcionados às proteínas Proteína Quinase Dependente de DNA (DNA-PK) e DNA Polimerase Theta (PolΘ), e demonstraram que a combinação dessas duas moléculas aumentou dramaticamente o desempenho da edição genética “knock-in”. Esta estratégia, denominada 2iHDR, superou as estratégias descritas anteriormente que visavam aumentar a eficiência de knock-in com inibidores de pequenas moléculas.
Este artigo também documenta um novo sistema baseado em sequenciamento de próxima geração (NGS) que pode ser usado para caracterizar os efeitos de inibidores no CRISPR-Cas9. Esta ferramenta de acesso aberto, que os autores chamaram de KI-Seq, permite aos pesquisadores analisar as contribuições de diferentes vias de reparo do DNA após o tratamento com CRISPR-Cas9. Ao contrário de ferramentas comparáveis, o KI-Seq pode ser usado com qualquer tipo de célula, incluindo células primárias que não se dividem.
Os cientistas pesquisadores da Promega, Marie Schwinn e Michael Slater, contribuíram para esta pesquisa liderada por cientistas da AstraZeneca.
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